[摘要] 目的 分析血清胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242在胰腺癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值。 方法 選取解放軍北京軍區(qū)總醫(yī)院、石景山醫(yī)院診為胰腺癌未經(jīng)治療的患者25例，隨機(jī)選取體檢中心健康體檢者35例為對(duì)照組。入組者均留取血清標(biāo)本，采用 ELISA法半定量檢測(cè)血清胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242的含量。 結(jié)果 血清胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242診斷胰腺癌ROC曲線下面積均>0.5(P<0.05)，其中胰蛋白酶原-2曲線下面積最大，其次為CA199，CA50與CA242相仿。 結(jié)論 4種血清腫瘤標(biāo)志物胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242對(duì)胰腺癌均有一定的診斷價(jià)值，但因各自具有局限性，均非單一理想診斷胰腺癌的腫瘤標(biāo)志物。

　　[關(guān)鍵詞] 醫(yī)學(xué)核心期刊,胰腺癌,血清胰蛋白酶原-2,CA199,CA50,CA242

　　胰腺癌是一種起病隱匿、進(jìn)展速度快、預(yù)后極差的消化系惡性腫瘤，5年生存率在所有惡性腫瘤中最低，在美國(guó)僅為6%左右，即使已行早期根治性手術(shù)切除的患者5年生存率也只有24%，但因其起病隱匿，53%的患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，5年生存率僅為0～2%[1]。在胰腺癌早期診斷方法中，腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法簡(jiǎn)便、費(fèi)用低廉，已被廣泛應(yīng)用于臨床。目前比較普遍應(yīng)用于胰腺癌診斷的血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物有CA199、CA50、CA242等。胰蛋白酶原-2，絲氨酸蛋白酶，絕大部分由胰腺腺泡分泌，以酶原的形式分泌到胰液中，Hedstr??m等[2]的研究提示，胰蛋白酶原-2可能與胰腺癌相關(guān)，本研究采用 ELISA法定量檢測(cè)胰腺癌、正常對(duì)照者血清中胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242含量，應(yīng)用ROC曲線探討其在檢測(cè)胰腺癌中的應(yīng)用價(jià)值。

　　1 資料與方法

　　1.1 一般資料

　　收集2009年12月～2011年6月解放軍北京軍區(qū)總醫(yī)院、2011年6 月～2012年2月北京市石景山醫(yī)院就診內(nèi)、外科未經(jīng)治療的胰腺癌住院患者25例為胰腺癌組，其中男14例，女11例，平均年齡(66.36±12.98)歲，入組前均未行手術(shù)及放化療治療，均由術(shù)后病理或影像學(xué)資料+長(zhǎng)期隨訪證實(shí)。隨機(jī)選取同期于解放軍北京軍區(qū)總醫(yī)院及石景山醫(yī)院體檢中心進(jìn)行健康體檢的35例為健康對(duì)照組，其中男20例，女15例，平均年齡(43.54±11.28)歲，均無(wú)明顯上消化道癥狀及胰腺疾病病史;并排除其他腫瘤患者及孕婦、酗酒者、藥癮者。本研究獲得上述兩家醫(yī)院倫理委員會(huì)倫理審查批準(zhǔn)。

　　1.2 標(biāo)本采集與檢測(cè)

　　留取清晨空腹靜脈全血4 ml，標(biāo)本經(jīng)1000×g離心后去上層血清分裝至Eppendorf(EP)管凍存于-70℃，檢測(cè)前1天將凍存標(biāo)本于4℃冷藏室解凍，檢測(cè)前取出放置室溫(20℃)1 h，應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)ELISA操作流程(雙抗體夾心法)檢測(cè)，采用全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀及相應(yīng)檢測(cè)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，胰蛋白酶原-2及CA199、CA242、 CA50檢測(cè)試劑盒由北京永瀚星港生物技術(shù)有限公司惠贈(zèng)，酶標(biāo)儀為全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀(OLY- MPUS5421全自動(dòng)生化分析儀)。

　　1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

　　應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，繪制受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC曲線)，找出最佳截?cái)帱c(diǎn)(ROC曲線上最左上方的點(diǎn)，此時(shí)靈敏度及特異度均較高，或根據(jù)文獻(xiàn)設(shè)定的臨界值選取臨界點(diǎn))，因數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，采用中位數(shù)、四分位數(shù)間距描述各組結(jié)果。

　　2 結(jié)果

　　各腫瘤標(biāo)志物ROC曲線如圖1。

　　圖1 各腫瘤標(biāo)志物ROC曲線

　　胰蛋白酶原-2：AUC=0.988，P<0.01，拒絕無(wú)效假設(shè)(AUC=0.5);CA199：AUC=0.906，P<0.01，拒絕無(wú)效假設(shè)(AUC=0.5);CA50：AUC=0.833，P<0.01，拒絕無(wú)效假設(shè)(AUC=0.5);CA242：AUC=0.834，P<0.01，拒絕無(wú)效假設(shè)(AUC=0.5)

　　2.1 血清胰蛋白酶原-2鑒別正常人和胰腺癌的靈敏度和特異度

　　以點(diǎn)SEN 0.960(1-SPE 0.086)為最佳臨界點(diǎn)，其對(duì)應(yīng)的臨界值為1.85 ng/ml，ROC曲線下面積為0.988(P<0.01)，此時(shí)血清胰蛋白酶原-2用于鑒別胰腺癌患者與正常人的靈敏度為96%、特異度為 91.4%(圖1D)，兩組血清胰蛋白酶原-2含量見(jiàn)表1。

　　表1 兩組血清胰蛋白酶原-2含量的檢測(cè)值(ng/ml)

　　M：中位數(shù);QL-QU：四分位數(shù)間距;Min-Max：最小值-最大值

　　2.2 CA199鑒別正常人和胰腺癌的靈敏度和特異度

　　當(dāng)前通常以37 U/ml作為胰腺癌診斷臨界值，本試驗(yàn)選取最接近點(diǎn)SEN 0.88(1-SPE 0.171)，相應(yīng)臨界值為37.20 U/ml，ROC曲線下面積為0.906(P<0.01)，此時(shí)CA199鑒別胰腺癌與正常人的靈敏度為88%、特異度為82.9%(圖1B)，兩組血清CA199含量的檢測(cè)值見(jiàn)表2。

　　表2 兩組血清CA199含量的檢測(cè)值(U/ml)

　　M：中位數(shù);QL-QU：四分位數(shù)間距;Min-Max：最小值-最大值

　　2.3 CA50鑒別正常人和胰腺癌的靈敏度和特異度

　　當(dāng)前通常以20 U/ml作為胰腺癌診斷臨界值，本試驗(yàn)選取最接近點(diǎn)SEN 0.72(1-SPE 0.200)，相應(yīng)臨界值為19.68 U/ml，ROC曲線下面積為0.833(P<0.01)，此時(shí)CA50鑒別胰腺癌與正常人的靈敏度為72%、特異度為80%(圖1A)，兩組血清 CA50含量的檢測(cè)值見(jiàn)表3。 　　表3 兩組血清CA50含量的檢測(cè)值(U/ml)

　　M：中位數(shù);QL-QU：四分位數(shù)間距;Min-Max：最小值-最大值

　　2.4 CA242鑒別正常人和胰腺癌的靈敏度和特異度

　　當(dāng)前通常以20 U/ml作為胰腺癌診斷臨界值，本試驗(yàn)選取最接近點(diǎn)SEN 0.68(1-SPE 0.143)，相應(yīng)臨界值為20.45 U/ml，ROC曲線下面積為0.834(P<0.01)，此時(shí)CA242鑒別胰腺癌與正常人的靈敏度為68%、特異度為85.7%(圖1C)，兩組血清CA242含量的檢測(cè)值見(jiàn)表4。

　　表4 兩組血清CA242含量的檢測(cè)值(U/ml)

　　M：中位數(shù);QL-QU：四分位數(shù)間距;Min-Max：最小值-最大值

　　3 討論

　　胰腺癌是預(yù)后極差的惡性腫瘤，近年我國(guó)胰腺癌發(fā)病率明顯上升，且多數(shù)胰腺癌確診時(shí)已屬中晚期，失去了最佳治療時(shí)機(jī)，預(yù)后差[3]。Pelaez- Luna等[4]回顧性分析45例胰腺癌患者114次CT掃描(胰腺癌診斷時(shí)或診斷前)，發(fā)現(xiàn)在臨床診斷胰腺癌前6個(gè)月做CT掃描，部分未檢測(cè)到病變，部分為可切除性病變，但有臨床癥狀患者幾乎均屬于不可切除性胰腺癌，提示在胰腺癌臨床診斷前，僅有6個(gè)月的時(shí)間窗，此時(shí)病灶多數(shù)可切除。但多數(shù)無(wú)癥狀者，一般不會(huì)就診，故“因癥就診”者是不太可能檢測(cè)到真正意義上的早期可治愈的胰腺癌的，必須對(duì)無(wú)癥狀者進(jìn)行篩查才有可能發(fā)現(xiàn)早期胰腺癌[5]。腫瘤標(biāo)志物是指在腫瘤發(fā)生和增殖過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞所產(chǎn)生或分泌并釋放到血液、細(xì)胞及體液中，反映腫瘤存在和生長(zhǎng)的一類(lèi)物質(zhì)，已被廣泛應(yīng)用于臨床，在腫瘤的診斷和預(yù)后判斷中發(fā)揮了巨大作用。糖類(lèi)抗原CA199是一種非特異性的腫瘤相關(guān)抗原，在胰腺癌患者血清中升高最為顯著[6]，是當(dāng)前國(guó)內(nèi)外應(yīng)用最廣泛的胰腺癌腫瘤標(biāo)志物[7]。CA50是一種缺少巖藻糖殘基碳水化合物的糖蛋白，其構(gòu)型與CA199有相似的抗原決定簇，Lewis抗原陽(yáng)性或陰性的人種均能檢測(cè)出，故認(rèn)為 CA50對(duì)腫瘤的識(shí)別譜較CA199更為廣泛[8]。CA242主要存在于胰腺和結(jié)腸惡性腫瘤細(xì)胞中，是不同于CA199和CA50的唾液酸化糖酯類(lèi)抗原，它的單克隆抗體與Lewis-a血型物質(zhì)及唾液酸化的半乳糖苷均不發(fā)生反應(yīng)，在胰腺癌中有較高的特異度、靈敏度。胰蛋白酶原-2，絕大部分以胰腺腺泡酶原的形式分泌到胰液中，并在腸內(nèi)被腸激酶激活。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，胰蛋白酶原-2在一些腫瘤細(xì)胞中呈高表達(dá)[9-12]。本試驗(yàn)胰腺癌組胰蛋白酶原-2含量明顯高于正常組，提示血清胰蛋白酶原-2與胰腺癌關(guān)系密切。本文采用ROC曲線對(duì)胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242在診斷胰腺癌中進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，胰蛋白酶原-2鑒別胰腺癌與正常人曲線下面積為0.988，以1.85 ng/ml為臨界點(diǎn)，靈敏度為96%，特異度為91.4%。CA199鑒別胰腺癌與正常人曲線下面積為0.906，以37.2 U/ml為臨界點(diǎn)，靈敏度為88%，特異度為82.9%。CA50鑒別胰腺癌與正常人曲線下面積為0.833，以19.68 U/ml為臨界點(diǎn)，靈敏度為72%，特異度為80%。CA724鑒別胰腺癌與正常人曲線下面積為0.834 U/ml，以20.45 U/ml為臨界點(diǎn)，靈敏度為68%，特異度為85.7%。

　　本試驗(yàn)中可見(jiàn)4種標(biāo)志物ROC曲線下面積，胰蛋白酶原-2最高，其次為 C199，CA242和CA50接近，均>0.5，提示以上腫瘤標(biāo)志物用于診斷胰腺癌均有一定的臨床意義。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道及臨床試驗(yàn)觀察，提示各自有其局限性：CA50無(wú)器官特異度，多種腫瘤中均可增高，尤其是胃腸癌，在肝膽疾病患者，尤其是黃疸中也升高[7]，因此單獨(dú)測(cè)定CA50對(duì)胰腺癌的診斷意義較小。Kawa等[13]認(rèn)為，CA242比CA199和CA50更特異，在胰腺炎、慢性肝炎和肝硬化等良性疾病中也很少升高，并且不受肝實(shí)質(zhì)損害、膽汁淤積的影響，但也有文獻(xiàn)報(bào)道CA242、CA50的靈敏度和特異度均不優(yōu)于CA199[14]。盡管CA199是目前對(duì)胰腺癌靈敏度最好的標(biāo)志物[7]，但在Lewisa陰性基因人群中無(wú)法表達(dá)，因此此血清型的腫瘤患者表現(xiàn)為CA199陰性。此外，急慢性胰腺炎、膽囊炎、膽管阻塞、肝炎、肝硬化等疾病中，CA199也有不同程度的升高，且在分化差的腫瘤中表達(dá)也較低[15-16]。目前鮮有關(guān)于胰蛋白酶原-2與胰腺腫瘤大小、病情嚴(yán)重程度、病理分期相關(guān)性，及是否能預(yù)測(cè)胰腺癌預(yù)后、評(píng)價(jià)治療效果的研究報(bào)道，且有文獻(xiàn)報(bào)道[17]胰蛋白酶原-2在急性胰腺炎患者血清中呈現(xiàn)高表達(dá)，因此，胰蛋白酶原-2也非胰腺癌絕對(duì)理想指標(biāo)。目前尚未發(fā)現(xiàn)單一理想診斷胰腺癌的腫瘤標(biāo)志物，近年傾向于將靈敏度、特異度較高的腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)。

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