中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)最新期刊目錄

枝睪闊盤吸蟲FABP基因的原核表達(dá)及多克隆抗體制備————作者：李聞靜;苗壯;周芳芳;孫淑雯;李芬;

摘要：對(duì)枝睪闊盤吸蟲（Eurytremacladorchis）的脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP）進(jìn)行原核表達(dá)與鑒定，并制備鼠抗EcFABP多克隆抗體。方法 通過PCR技術(shù)擴(kuò)增了含開放閱讀框（ORF）的EcFABP序列，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-EcFABP。IPTG誘導(dǎo)EcFABP重組蛋白表達(dá)并進(jìn)行最佳誘導(dǎo)時(shí)間優(yōu)化。將純化后的重組蛋白與弗氏佐劑等比例乳化后免疫BALB/c小鼠，制備多克隆抗體，經(jīng)ELIS...

禽流感病毒H1N1亞型NA蛋白單克隆抗體的制備與鑒定————作者：呂雪華;牛世奇;潘晟輝;張?jiān)葡?潘學(xué);張志飛;許榜豐;閆鳴昊;閆大為;滕巧泱;苑純秀;李澤君;劉芹防;

摘要：流感病毒是分節(jié)段的負(fù)鏈RNA病毒，高致病性禽流感病毒可導(dǎo)致嚴(yán)重的致死性疾病，已給全球禽類養(yǎng)殖及相關(guān)產(chǎn)業(yè)造成了巨大損失，并對(duì)人類健康造成了極大威脅，流感病毒表面的NA蛋白與流感病毒的功能息息相關(guān)，NA蛋白由RNA片段6編碼，NA蛋白的主要作用是在新生病毒粒子從細(xì)胞膜表面出芽的階段切割病毒和細(xì)胞膜糖蛋白的SA結(jié)合以避免病毒粒子的聚集從而從被感染細(xì)胞表面釋放。為獲得NA單克隆抗體為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供幫助，本實(shí)...

鼠源抗ALV-p27單鏈抗體噬菌體文庫(kù)的構(gòu)建與篩選————作者：薛希彤;范夢(mèng)雅;孟子毅;芮萍;李封賽;楊?yuàn)檴?楊義;王林雨;王洪濤;張劍;檀衛(wèi)東;馬增軍;王麗麗;宋濤;

摘要：為獲取與禽白血病病毒（ALV）p27抗原高親和力結(jié)合的特異性單鏈抗體（scFv），本研究以ALV-p27蛋白免疫的BALB/c小鼠脾淋巴細(xì)胞為材料，提取RNA，反轉(zhuǎn)錄并擴(kuò)增抗體可變區(qū)基因，通過SOE-PCR技術(shù)成功構(gòu)建了抗ALV-p27鼠源scFv噬菌體展示文庫(kù)。經(jīng)過三輪生物淘選，篩選出6株高親和力scFv抗體，并將其序列插入pCAGGS-Fc載體，在HEK293T細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染表達(dá)。最終，通過間接...

糖基化修飾在冠狀病毒感染中的作用概述————作者：侯銳鋒;侯晉輝;張粵;史晨曦;袁晉;張?jiān)?祖少坡;魏戰(zhàn)勇;

摘要：冠狀病毒可導(dǎo)致人類和動(dòng)物呼吸、消化系統(tǒng)疾病，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致死亡。近些年，冠狀病毒新發(fā)、暴發(fā)、頻發(fā)嚴(yán)重，威脅人類公共衛(wèi)生安全和畜牧業(yè)健康。目前，對(duì)冠狀病毒感染和復(fù)制機(jī)制的認(rèn)識(shí)不足制約了冠狀病毒防控制劑的研制。糖基化修飾是一種重要的蛋白翻譯后修飾，參與宿主蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、增強(qiáng)信號(hào)傳導(dǎo)等生命進(jìn)程。冠狀病毒編碼的多個(gè)蛋白能夠發(fā)生不同類型的糖基化修飾，這些糖基化修飾在調(diào)控冠狀病毒感染、跨種傳播和免疫逃逸等過程中發(fā)...

BCoV熒光RT-RAA檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用————作者：羅健丹;崔進(jìn);劉瑩;趙達(dá)卓;房琳琳;張慧;沙洲;魏榮;肖嘯;董雅琴;

摘要：為了建立一種快速檢測(cè)牛冠狀病毒（Bovine coronavirus，BCoV）的方法，本研究以BCoV相對(duì)保守的N基因?yàn)槟０澹�設(shè)計(jì)特異性探針和引物，通過篩選最優(yōu)引物對(duì)、摸索最適反應(yīng)溫度，建立BCoV熒光RT-RAA檢測(cè)方法，并對(duì)其敏感性、特異性和重復(fù)性進(jìn)行研究。該方法能夠在41 ℃恒溫條件下，在20 min內(nèi)完成檢測(cè)，最低檢測(cè)限為24 copies/μL，多次重復(fù)試驗(yàn)中擴(kuò)增曲線重合率高，且與牛輪...

鴨甲肝病毒3型、鴨星狀病毒3型、鴨腺病毒3型多重PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用————作者：鐘敏;程龍飛;劉榮昌;萬春和;傅光華;黃瑜;

摘要：為建立能同時(shí)檢測(cè)鴨甲肝病毒3型（DHAV-3）、鴨星狀病毒3型（DAstV-3）和鴨腺病毒3型（DAdV-3）的多重PCR方法，根據(jù)DHAV-3、DAstV-3、DAdV-3基因組保守區(qū)域設(shè)計(jì)3對(duì)特異性引物，預(yù)期擴(kuò)增片段大小分別為298 bp、505 bp、668 bp。通過對(duì)反應(yīng)體系、反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，建立了DHAV-3、DAstV-3和DAdV-3的多重PCR檢測(cè)方法，對(duì)其特異性、敏感性和重復(fù)...

PKR基因敲除細(xì)胞系的構(gòu)建及其對(duì)新城疫病毒增殖效率的評(píng)價(jià)————作者：孫一帆;丁鏟;劉秀梵;孟春春;

摘要：探究蛋白激酶R（Protein kinase R， PKR）對(duì)新城疫病毒（Newcastle disease virus， NDV）復(fù)制的影響。利用慢病毒介導(dǎo)的CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)構(gòu)建PKR基因敲除的A549細(xì)胞系(A549 PKR KO)。通過構(gòu)建V2-sgPKR重組質(zhì)粒并與輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至HEK-293T細(xì)胞，收獲慢病毒并感染A549細(xì)胞，經(jīng)嘌呤霉素篩選后得到PKR敲除的A549...

獸用注射用鹽酸林可霉素鹽酸大觀霉素凍干粉的研制與表征————作者：周婷婷;張可煜;王春梅;周文;王霄旸;黃博;

摘要：本研究制備了一種獸用注射用鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素凍干粉針劑并評(píng)價(jià)了其理化特性。以鹽酸大觀霉素與鹽酸林可霉素為主藥成分，乳糖作為賦形劑，采用真空冷凍干燥技術(shù)制備得到具有良好外觀的凍干制劑，并選擇熱重曲線法、X-射線衍射法、傅里葉變換紅外光譜法和掃描電鏡法等對(duì)凍干粉進(jìn)行表征。X-射線衍射分析結(jié)果顯示，凍干過程使藥物晶體完全無定形化；掃描電鏡圖進(jìn)一步證明藥物由晶態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)闊o定形態(tài)，并形成多孔結(jié)構(gòu)；熱重分...

乳房鏈球菌前噬菌體裂解酶Lys1519的活性測(cè)定與分析————作者：劉凱迪;王媛;李欣悅;韓笑;李逸萱;李興帥;牛建蕊;張興林;馬俊飛;

摘要：鏈球菌感染是造成奶牛乳腺炎的重要病原體之一，抗生素的濫用加劇了其耐藥性導(dǎo)致治療難度的增加，給乳制品行業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。噬菌體溶菌素作為一種新型抗菌藥物，在對(duì)抗耐藥革蘭氏陽性菌方面展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛力。本研究對(duì)一株乳房鏈球菌的基因組測(cè)序和前噬菌體分析，挖掘出一種前噬菌體裂解酶，通過異源表達(dá)、裂解曲線和裂解譜測(cè)定、結(jié)構(gòu)和催化位點(diǎn)分析等探究其生物學(xué)活性。乳房鏈球菌SD7的基因組測(cè)序顯示，其前噬菌體...

一株牛源D型多殺性巴氏桿菌的分離鑒定、藥敏試驗(yàn)及毒力測(cè)定————作者：孫石靜;王亞非;李海晴;閆國(guó)輝;閆振;張春曉;宋程;張淵魁;

摘要：本研究從福建省某肉牛場(chǎng)患牛鼻拭子樣品中分離出一株多殺性巴氏桿菌，經(jīng)16S rRNA測(cè)序和莢膜血清型PCR擴(kuò)增鑒定為D型，命名為Pm-FPd株。對(duì)Pm-FPd株巴氏桿菌生物學(xué)特性進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，該菌株生長(zhǎng)菌落呈淡灰白色露珠狀，革蘭氏陰性，僅甘露醇生化反應(yīng)為陽性；藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，該菌株對(duì)多數(shù)抗生素高度敏感，但對(duì)鏈霉素、丁胺卡那和新霉素中度敏感；小鼠攻毒試驗(yàn)結(jié)果顯示，以10⁶...

新型鴨環(huán)狀病毒的分離與基因組特征分析————作者：劉麗萍;胡峰;劉國(guó)發(fā);楊靜靜;路曉;郭效珍;李玉峰;于可響;

摘要：本研究從河南商丘地區(qū)產(chǎn)蛋下降并伴有脾臟腫大的種鴨中分離到1株病毒，暫定名為新型鴨環(huán)狀病毒（NDORV）。該病毒能在SPF鴨胚中繁殖，但致死率很低，主要導(dǎo)致鴨胚胚肝壞死。該病毒也能在鴨胚成纖維細(xì)胞（DEF）上生長(zhǎng)，引起部分細(xì)胞圓形皺縮、碎裂。在透射電鏡下觀察，病毒呈二十面體結(jié)構(gòu)，無囊膜，大小60 nm左右。利用二代測(cè)序技術(shù)對(duì)病毒進(jìn)行基因組測(cè)序，發(fā)現(xiàn)其基因組由10個(gè)雙股RNA節(jié)段構(gòu)成，共編碼12個(gè)蛋白...

西藏部分地區(qū)牦牛乳汁中鏈球菌的污染情況調(diào)查————作者：馬弘財(cái);秦浩峰;孟繁星;卓瑪;陳建春;王冬經(jīng);曾江勇;

摘要：為掌握西藏部分地區(qū)牦牛乳汁被鏈球菌的污染的情況，并檢測(cè)鏈球菌所攜帶的毒力基因、耐藥基因和對(duì)抗菌藥的敏感性。本試驗(yàn)從來自拉薩市和那曲市95份牦牛乳汁中進(jìn)行鏈球菌的分離鑒定，并采用PCR法、K-B藥敏紙片法對(duì)所分離的鏈球菌開展毒力基因和耐藥基因的攜帶情況和藥物敏感性檢測(cè)。結(jié)果顯示：95份牦牛乳汁中樣品中分離得到19株鏈球菌，分離率為20%，其中11株為多動(dòng)物鏈球菌，5株為馬鏈球菌，2株為停乳鏈球菌，1...

北極狼源犬細(xì)小病毒的分離鑒定及中和活性單抗的制備————作者：焦國(guó)財(cái);梁欣雨;張彥;張博軒;曲明陽;王永志;

摘要：本研究從病死北極狼體內(nèi)分離并鑒定犬細(xì)小病毒（CPV），將該株病毒暫時(shí)命名為CPV-JL-23。并制備該毒株的中和活性單克隆抗體。本研究以病死北極狼的臨床癥狀、分子檢測(cè)和病原分離結(jié)果為依據(jù)，分離鑒定對(duì)北極狼為高致病性的CPV病毒，通過序列分析進(jìn)行亞型鑒定；以病毒基因組DNA為模板，利用PCR擴(kuò)增VP2基因，通過原核系統(tǒng)表達(dá)VP2蛋白，以純化后的蛋白為抗原對(duì)BALB/c小鼠進(jìn)行免疫；取免疫后的脾細(xì)胞與...

檢測(cè)牛病毒性腹瀉病毒的RT-CPA-CRISPR/Cas12a方法的建立及應(yīng)用————作者：蒙琦;常亮;楊明;曹映輝;

摘要：為建立一種檢測(cè)牛病毒性腹瀉病毒的RT-CPA-CRISPR/Cas12a方法，本實(shí)驗(yàn)基于BVDV的E0蛋白基因序列，設(shè)計(jì)了CPA特異性引物，同時(shí)基于CRISPR/Cas12a設(shè)計(jì)原則，設(shè)計(jì)了crRNA靶向RT-RAA擴(kuò)增產(chǎn)物，并優(yōu)化了RT-CPA-CRISPR/Cas12a反應(yīng)體系，此外，以建立的該方法進(jìn)行了臨床樣品檢測(cè)。結(jié)果顯示，所建立的檢測(cè)方法對(duì)BVDV的最低檢出限為8.0 copies/μL...

非洲豬瘟病毒K205R蛋白原核表達(dá)及免疫檢測(cè)————作者：田傳文;劉英楠;郭偉強(qiáng);段緒來;王蓉蓉;孫華偉;李遙;周州;王乃東;陳鴻軍;

摘要：K205R蛋白是非洲豬瘟病毒（ASFV）編碼的非結(jié)構(gòu)蛋白，具有良好的免疫原性。本研究為獲得ASFV K205R蛋白多克隆抗體，構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a-K205R，在成功表達(dá)重組蛋白后，使用His-tag親和磁珠對(duì)重組蛋白進(jìn)行純化。以純化的K205R重組蛋白作為抗原免疫BALB/c小鼠制備多克隆抗體。使用ELISA方法檢測(cè)其抗體效價(jià)，用Western blot和IFA驗(yàn)證多抗的特異性。結(jié)果：...

基于多元Logistic回歸模型的牛結(jié)核病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與預(yù)測(cè)研究————作者：雷瑋玟;李錦瓊;歐陽澤龍;何慶華;

摘要：為了快速評(píng)估牛結(jié)核病導(dǎo)致的食品安全和公共衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)，開展了牛結(jié)核病的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與預(yù)警研究。基于WOAH收集的數(shù)據(jù)，采用AHP層次分析法、系統(tǒng)聚類法和K均值聚類法建立風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型。通過AHP層次分析法得到牛結(jié)核病風(fēng)險(xiǎn)值R的評(píng)估公式為R=0.4765×S1+0.2410×S2+0.1200×S3+0.1200×S4+0.0426×S5。而通過系統(tǒng)聚類分析以及K均值聚類分析得到牛結(jié)核病風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)分類為4類：低...

犬種布魯氏菌BP26蛋白單鏈抗體的制備————作者：孫鵬翔;尹伊;楊新梅;劉津月;鮑衍清;張廣凍;祁晶晶;劉冠慧;田明星;王少輝;

摘要：犬布魯氏菌病是一種主要由犬種布魯氏菌感染引起的重要人畜共患病，其精準(zhǔn)診斷是控制該病的重要策略之一。BP26蛋白是布魯氏菌的一種主要免疫原性蛋白，其作為靶標(biāo)在開發(fā)布魯氏菌診斷試劑中具有重要價(jià)值。本研究首先通過PCR方法將bp26基因克隆至表達(dá)載體pCold I中，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行表達(dá)并純化BP26蛋白。隨后，將該蛋白免疫接種BALB /c雌性小鼠，采用傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)制備抗BP2...

偽狂犬病毒VP16蛋白的核定位信號(hào)鑒定————作者：李佳佳;梁引龍;閆婉婉;李松楠;王晨;童武;于海;孔寧;單同領(lǐng);鄭浩;徐前明;

摘要：偽狂犬病毒（PRV）UL48基因編碼的結(jié)構(gòu)蛋白VP16在病毒復(fù)制及組裝中發(fā)揮重要作用，本研究通過外源表達(dá)VP16蛋白，初步發(fā)現(xiàn)其能夠在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中定位。通過分析PRV VP16發(fā)揮核定位功能的結(jié)構(gòu)，旨在探明其核轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制和轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能。利用在線軟件預(yù)測(cè)VP16蛋白中存在的核定位信號(hào)（NLS），并構(gòu)建VP16蛋白截短體及NLS突變體與EGFP蛋白重組融合質(zhì)粒。經(jīng)IFA技術(shù)觀察EGFP融合蛋白的亞細(xì)...

富氧型等離子空氣消毒器對(duì)豬舍空氣微生物和有害氣體消除作用研究————作者：鄭家楊;趙乾明;魏建超;趙健;杜波;

摘要：研究一種富氧型等離子空氣消毒器對(duì)豬舍空氣微生物和有害氣體的消殺效果。試驗(yàn)選取上海某豬場(chǎng)，在試驗(yàn)組豬舍安裝某富氧型等離子空氣消毒器，檢測(cè)試驗(yàn)組豬舍，使用某富氧型等離子空氣消毒器前后，豬舍空氣氣溶膠及空氣沉降菌的細(xì)菌總數(shù)、大腸桿菌數(shù)量和金黃色葡萄球菌數(shù)量及舍內(nèi)有害氣體濃度的結(jié)果。結(jié)果顯示：該富氧型等離子空氣消毒器連續(xù)作用48 h后，對(duì)豬舍空氣氣溶膠及空氣沉降菌的細(xì)菌總數(shù)、大腸桿菌數(shù)量和金黃色葡萄球菌數(shù)...

貓泛白細(xì)胞減少癥病毒VP2蛋白的表達(dá)純化及多克隆抗體的制備和應(yīng)用————作者：羅茂青;龐帥賽;田杰;李娜;朱雯琪;王詩詩;李傳峰;朱杰;劉光清;付強(qiáng);孟春春;

摘要：本研究構(gòu)建了貓泛白細(xì)胞減少癥病毒（FPV）VP2蛋白的原核表達(dá)體系，并制備其特異性多克隆抗體，為FPV的血清學(xué)診斷及疫苗效果評(píng)價(jià)提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)材料。以本實(shí)驗(yàn)室分離的FPV-SH0918株DNA為模板，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增VP2中和抗原表位區(qū)，插入pCold I載體，構(gòu)建重組質(zhì)粒FPV-VP2-pCold I，并轉(zhuǎn)化Rosetta（DE3）感受態(tài)細(xì)胞在16℃誘導(dǎo)表達(dá)。純化后的VP2重組蛋白...

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